Protein tái tổ hợp là gì? Các công bố khoa học về Protein tái tổ hợp

Factor VIII tái tổ hợp mới có thời gian bán hủy kéo dài, rFVIIIFc, đã được phát triển nhằm giảm tần suất tiêm phòng. rFVIIIFc được dung nạp tốt ở bệnh nhân mắc bệnh máu khó đông A nặng, và dẫn đến tỷ lệ xuất huyết thấp khi được tiêm 1 đến 2 lần mỗi tuần.

Chúng tôi đã nghiên cứu sự kết tụ không tự nhiên của yếu tố kích thích thuộc địa bạch cầu trung tính tái tổ hợp ở người (rhGCSF) trong các điều kiện dung dịch mà rhGCSF tự nhiên vừa ổn định về cấu hình so với trạng thái không gấp gọn vừa có nồng độ thấp hơn giới hạn hòa tan của nó. Quá trình kết tụ của rhGCSF đầu tiên liên quan đến việc ảnh hưởng đến cấu trúc tự nhiên của nó để hình thành một trạng thái chuyển tiếp mở rộng về mặt cấu trúc, sau đó là quá trình lắp ráp để hình thành một tập hợp không thể đảo ngược. Rào cản năng lượng của hai bước này được phản ánh trong các giá trị năng lượng tự do thực nghiệm của sự không gấp gọn (ΔG_unf) và hệ số virial thứ hai thẩm thấu (B₂₂), tương ứng. Dưới các điều kiện dung dịch mà sự ổn định cấu hình của rhGCSF chiếm ưu thế (tức là, ΔG_{unf lớn và B22 âm), bước đầu tiên là bước giới hạn tỷ lệ, và việc tăng cường ΔGunf (ví dụ, bằng cách thêm saccarozơ) làm giảm sự kết tụ. Trong các dung dịch mà sự ổn định keo cao (tức là, giá trị B22 lớn và dương), bước thứ hai là bước giới hạn tỷ lệ, và các điều kiện dung dịch (ví dụ, pH thấp và độ dẫn điện thấp) làm tăng sự tương tác đẩy giữa các phân tử protein có hiệu quả trong việc giảm sự kết tụ. Sự kết tụ của rhGCSF do đó được kiểm soát bởi cả sự ổn định cấu hình và sự ổn định keo, và tùy thuộc vào các điều kiện dung dịch, một trong hai thứ có thể là bước giới hạn tỷ lệ.}

Các sản phẩm yếu tố VIII (FVIII) hiện tại có thời gian bán hủy (t1/2) khoảng 8-12 giờ, yêu cầu tiêm tĩnh mạch thường xuyên để dự phòng và điều trị cho bệnh nhân hemophilia A. rFVIIIFc là một protein fusion tái tổ hợp được tạo thành từ một phân tử FVIII liên kết cộng hóa trị với miền Fc của IgG1 người để kéo dài thời gian bán hủy của rFVIII trong tuần hoàn. Nghiên cứu đầu tiên trên người này được thực hiện trên những đối tượng đã được điều trị trước đó với hemophilia A nặng, nhằm điều tra tính an toàn và dược động học của rFVIIIFc. Mười sáu đối tượng đã nhận một liều duy nhất của rFVIII với liều 25 hoặc 65 IU/kg, sau đó là một liều tương đương của rFVIIIFc. Hầu hết các sự kiện bất lợi không liên quan đến thuốc nghiên cứu. Không có đối tượng nào phát triển kháng thể chống lại rFVIIIFc hay các chất ức chế. So với rFVIII, rFVIIIFc cho thấy thời gian bán hủy loại bỏ kéo dài 1.54- đến 1.70 lần, độ thanh thải thấp hơn 1.49- đến 1.56 lần, và tổng mức độ tiếp xúc toàn thân cao hơn 1.48- đến 1.56 lần. rFVIII và rFVIIIFc có nồng độ đỉnh trong huyết tương và khả năng hồi phục tương đương khi phụ thuộc vào liều. Thời gian để đạt hoạt động FVIII 1% trên mức nền là khoảng 1.53 đến 1.68 lần dài hơn so với rFVIII ở các mức liều khác nhau. Mỗi đối tượng cho thấy thời gian tiếp xúc kéo dài với rFVIIIFc so với rFVIII. Do đó, rFVIIIFc có thể cung cấp một phương pháp điều trị khả thi để đạt được sự bảo vệ hemostatic kéo dài và cho liều lượng ít thường xuyên hơn ở bệnh nhân hemophilia A. Thử nghiệm này đã được đăng ký tại www.clinicaltrials.gov với số hiệu NCT01027377.

Các chiến lược cho ăn khác nhau trong việc sản xuất interferon‐γ của người bằng cách sử dụng hệ thống biểu hiện kích thích bằng isopropyl β‐d‐thiogalactoside trong Escherichia coli BL21(DE3) (plasmid pET3a‐ifnγ) đã được nghiên cứu. Bốn chế độ cung cấp thức ăn theo đợt đã được thiết kế để so sánh ảnh hưởng của μ (tốc độ tăng trưởng riêng) đến sản xuất protein tái tổ hợp, tiêu thụ chất nền, hình thành sản phẩm phụ và độ ổn định của plasmid trong các môi trường nuôi cấy mật độ tế bào cao của E. coli. Kết quả cho thấy Y_p/s, sản lượng sản phẩm/chất nền của interferon‐γ bị ảnh hưởng đáng kể bởi μ trong suốt quá trình, nhưng sản lượng sản phẩm/sinh khối (Y_p/x) bị ảnh hưởng bởi μ ở giai đoạn trước khi kích thích. Bằng cách áp dụng một chiến lược cung cấp thức ăn hiệu quả, trong đó μ được duy trì ở mức tối đa có thể đạt được, protein tái tổ hợp đã tích lũy tới mức 60% tổng lượng protein tế bào và năng suất của nó đã được tăng lên đáng kể. Trong trường hợp này, tổng năng suất của sinh khối và protein tái tổ hợp lần lượt là 6.36 và 2.1, so với 1.91 và 0.16 g·h⁻¹·lít⁻¹ trong quá trình cho ăn theo hàm mũ, trong đó μ được giữ không đổi trong toàn bộ quá trình.

Chúng tôi đã tách chiết một đoạn DNA dài 2,5 kb từ plasmid pST5R7 mã hóa cho hệ thống sử dụng sucrose từ chủng Escherichia coli B-62, hệ thống này mang lại kiểu hình lên men sucrose cho các chủng E. coli K-12 đã chuyển gen. Việc xác định trình tự DNA cho thấy có một khung đọc mở hoàn chỉnh có độ tương đồng 98% với cscA, gen sucrose-hydrolase (invertase) của regulon csc từ E. coli EC3132. Đặc điểm chức năng chỉ ra rằng việc biểu hiện ở mức cao và việc giải phóng giới hạn invertase vào không gian ngoài màng góp phần vào khả năng lên men sucrose của các chủng E. coli K-12 đã chuyển gen mang cscA. Từ khóa: sử dụng sucrose, sucrose hydrolase, invertase, sản xuất protein tái tổ hợp.